線粒體染色試劑盒的分離原理
更新時間:2019-05-28 點擊次數(shù):1490
線粒體染色試劑盒用于動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合用于動物軟組織和硬組織及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組織學研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到既用性能穩(wěn)定。
核線粒體的分離原理:
1.通過機械方法破裂細胞。
2.通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞。
3.通過高速差速離心獲得線粒體。
使用注意事項:
1.全程低溫操作,將樣品管放在冰水浴而不是碎冰中。
2.快速、微量制備比大規(guī)模制備操作更方便快捷,因而更容易獲得完整的線粒體。
3.在不破壞亞細胞器的情況下、破碎細胞是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃均漿時較難破壁,因而要選小容量、玻璃均漿器,間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。在相差顯微鏡下檢查未裂解細胞應(yīng)在50%左右。研磨過度將破壞線粒體。研磨不足會降低得率。
4.離心力g計算正確的離心速度,不同離心機可依據(jù)此計算離心速度。
5.進行WesternBlot和2D-膠電泳,可直接加入樣品緩沖液裂解線粒體。
線粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線粒體,使之帶紅色熒光(Ex/Em=640/659nm)(Cy5filter)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物,屬線粒體選擇性染料,該染料能輕易進入活細胞內(nèi),通過線粒體膜電位變化滲透進入線粒體,并在線粒體中富集。線粒體染色試劑盒提供了標記線粒體的全套試劑,能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇,既可單獨使用,也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。