使用膠原酶要注意以下幾點(diǎn)
更新時(shí)間:2020-08-24 點(diǎn)擊次數(shù):1426
膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí),用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差,這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
膠原酶的使用要注意些什么:
1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊
2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi),每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時(shí)間與組織的類別很有關(guān)系,對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時(shí)間4~48h,對(duì)于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,可以認(rèn)為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,由于上皮細(xì)胞對(duì)此酶有耐受性,可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散,但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生長(zhǎng),因此,如無特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。
4.收集消化液(有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,接種培養(yǎng)瓶。