Evagreen  ( 20 × in water )

產(chǎn)品描述
Evagreen 是一種用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA 結(jié)合染料。該染料的諸多優(yōu)點(diǎn)使它遠(yuǎn)勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性，Evagreen有三個(gè)主要特點(diǎn)使它區(qū)別于SYBR Green I 。
首先，Evagreen對(duì)PCR的抑制性遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用Evagreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，Evagreen在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號(hào)。較高濃度的Evagreen也消除了“染料重分布"的缺陷，使Evagreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線(xiàn)分析（HRM）。該分析正被越來(lái)越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對(duì)PCR的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此SYBR Green I無(wú)法解決由低濃度造成的染料重分布問(wèn)題，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時(shí)，染料重分布問(wèn)題也可能影響常規(guī)熔解曲線(xiàn)的可靠性，因?yàn)榈腿埸c(diǎn)的DNA鏈可能由于這種原因而無(wú)法檢測(cè)到。    
第二，Evagreen的穩(wěn)定性強(qiáng)。在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。與之相反，SYBR Green I不穩(wěn)定而且降解后對(duì)PCR抑制性更強(qiáng)。
第三，Evagreen降低了細(xì)胞膜透性，因而比SYBR Green 1更加安全。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試結(jié)果顯示，Evagreen既沒(méi)有誘變性也沒(méi)有細(xì)胞毒性。相反，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細(xì)胞中可能抑制了正常DNA的修復(fù)機(jī)制，使其有誘變?cè)鰪?qiáng)作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應(yīng)該足夠重視。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品參數(shù)
λabs/λem = 500/530 nm (結(jié)合DNA)
λabs = 471 nm (未結(jié)合DNA)
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃短期避光保存，有效期12個(gè)月；-20℃長(zhǎng)期避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法
如下建立實(shí)驗(yàn)體系：（僅供參考）

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)20× Evagreen
主要試劑
1. Prime
hβ-actin：
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
2. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
3. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
4. BSA: Sigma(A7030)
5. 10 mM dNTPs: Takara(4019)
實(shí)驗(yàn)方案
1. 配制2× Evagreen Buffer

2. 配制 q-PCR反應(yīng)體系

【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同種類(lèi)的 DNA模板中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)_定合適的 DNA 模板添加量。cDNA作為模板時(shí)的添加量不要超過(guò) PCR 反應(yīng)液總體積的 10%。②引物終濃度一般控制在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)分組：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品孔（陽(yáng)性對(duì)照）、檢測(cè)樣品孔、空白對(duì)照孔（陰性對(duì)照）共三組，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，分別進(jìn)行三次平行實(shí)驗(yàn)。
4. 混勻離心、上機(jī)進(jìn)行熒光定量PCR（儀器為Roche：LC96）。
PCR程序：

5. 保存數(shù)據(jù)，判斷樣本質(zhì)量：
A．檢測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間的Ct值差
B．檢測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間的熒光強(qiáng)度差
檢測(cè)結(jié)果需達(dá)到：以上兩組檢測(cè)指標(biāo)無(wú)顯著性差異
注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

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